登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產(chǎn)品之一，產(chǎn)品優(yōu)勢 樣品種類多，質(zhì)控嚴格，高特異性，供貨快，已被國內(nèi)外廣大科研工作者使用，被稱謂：質(zhì)量信得過產(chǎn)品
通用名稱：登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)

規(guī)格：50T/盒

英文名稱：RSV-B Detection Kit (Real-Time PCR Method)

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對登革熱病毒2型(DFV-II)基因保守區(qū)設(shè)計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融不超過 5 次。有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。

【保存和運輸】上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.

實驗步驟：

一、 樣品RNA的抽提

二、 1. 取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

三、 2. 兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

四、 3. RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12 000 rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

五、 

六、 4. RNA清洗 移去上清液，每1 mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1 ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7 000 rpm離心5分鐘。

七、 

八、 5. RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

九、 

十、 6. 溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑應(yīng)立即放回。
3. 本試劑盒為10頭份量試劑，加樣和反應(yīng)程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不 、定時不準確造成無結(jié)果情況，不予負責。
4. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，應(yīng)高壓滅菌。
5. 注意防止試劑污染，在有效期限內(nèi)用完。