產(chǎn)品名稱：鴨瘟病毒(DPV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)

規(guī) 格： 50T
檢測方法： 實(shí)時熒光 PCR

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

產(chǎn) 地： 中國

用 途： 僅用于科研實(shí)驗(yàn)

雞馬立克病毒(MDV)檢測試劑盒(PCR法)

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

水樣便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

水樣便 13000rpm 離心 2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；疑似污染的水直接取 100μL

反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù) 個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

雞馬立克病毒(MDV)核酸檢測試劑盒(PCR法)實(shí)驗(yàn)操作

1.模板制備（樣本制備區(qū)）
建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行）
剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序?yàn)?/span>NG、待測樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。

Lactose Peptone Broth

伊紅美藍(lán)瓊脂 (EMB) 250g 弱選擇性培養(yǎng)基，用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌

Eosin-Methylene Blue Agar

亮綠瓊脂 250g 用于飲用水，水源水中沙門氏菌選擇性增菌

Brilliant Green Lactose Broth

亮綠乳糖培養(yǎng)基 250g 用于飲用天然礦泉水中大腸桿菌的檢驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）

Brilliant Green Lactose Medium

品紅亞硫酸鈉瓊脂（遠(yuǎn)滕氏瓊脂） 250g 用于飲用水、水源水中總大腸菌群的選擇性分離和確證

Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar

去氧膽酸鹽瓊脂 250g 用于大腸桿菌固體平板測定，腸道菌選擇性分離

Desoxycholate Lactose Agar

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂 (VRBA) 250g 用于大腸菌群的固體平板檢測（SN標(biāo)準(zhǔn)）

Violet Red Bile Agar

結(jié)晶紫中性紅膽鹽MUG瓊脂（VRBA-MUG） 100G 用于大腸菌群和大腸桿菌的固體平板檢測（BAM）

Violet Red Bile Agar with MUG

MR-VP培養(yǎng)基 250g 用于大腸桿菌的甲基紅和VP試驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)）

Methyl Red Voges Proskauer Broth

腸道菌計數(shù)瓊脂 (VRBDA) 250g 用于腸道菌計數(shù)和腸桿菌科鑒別

Violet Red Bile Dextrose Agar